Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomanas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần

nhulan
nhulan(2027 tài liệu)
(22 người theo dõi)
Lượt xem 77
8
Tải xuống 8,000₫
(Lịch sử tải xuống)
Số trang: 81 | Loại file: PDF
0

Gửi bình luận

Bình luận

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 19/11/2012, 15:13

Mô tả: Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomanas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** ĐỖ TH NGỌC HÂN CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Thng 09 / 2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: LÊ ĐÌNH ĐÔN ĐỖ TH NGỌC HÂN Kha: 2002 - 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Thng 09 / 2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY ************ TRANSFER gfp (GREEN FLUORESCENT PROEIN) GENE INTO Pseudomonas fluorescens BACTERIAL CELL BY TRIPARENTAL MATING MENTHOD Graduation thesis Major: Biotechnology Professor Student LE DINH DON DO THI NGOC HAN Term: 2002 - 2006 Ho Chi Minh City 09 / 2006 iv iv LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cm ơn: Gia đình là chỗ dựa về vật chất và tinh thần cho tôi trong suốt thời gian học tập và làm khóa luận. Ban gim hiệu Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. Ban chủ nhiệm cùng thầy cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học đã truyền đạt mọi kiến thức, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong thời gian học tập ở trƣờng. Thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hƣớng dẫn tôi trong suốt qu trình thực tập và hoàn tất khóa luận tốt nghiệp này. Thầy Zhang Liqun ở Đại Học Nông Nghiệp Trung Quốc đã cung cấp mẫu vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp, vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 và cc tài liệu phục vụ cho thí nghiệm. Ban gim đốc cùng cc anh chị trực thuộc Trung Tâm Phân Tích – Thí Nghiệm Hóa Sinh Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã hƣớng dẫn và chia sẻ cùng tôi những khó khăn trong thời gian thực hiện khóa luận. Anh Nguyễn Văn Lẫm đã nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Tất cả cc anh chị thuộc Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Học đã giúp đỡ tôi trong qu trình thực hiện đề tài. Cc bạn bè lớp Công Nghệ Sinh Học 28 đã giúp đỡ và động viên tôi trong suốt những năm học cũng nhƣ thời gian thực hiện khóa luận. Thành phố Hồ Chí Minh, thng 8 năm 2006 Sinh viên Đỗ Thị Ngọc Hân v v TÓM TẮT Đỗ Thị Ngọc Hân, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, “CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens” BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN. Đề tài đƣợc thực hiên ở Trƣờng Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, thời gian từ thng 02/2006 đến thng 08/2006, dƣới sự hƣớng dẫn cuả Thầy Lê Đình Đôn. Nội dung nghiên cứu Chọn lọc vi khuẩn Pseudomonas fluorescens trên môi trƣờng chọn lọc. Xây dựng quy trình tiếp hợp plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phƣơng php tiếp hợp ba thành phần (triparental mating). Tch chiết DNA plasmid pUT-gfp để làm mẫu dò. Tiến hành phƣơng php Dot Blot để kiểm tra gen đã chuyển. Xem biểu hiện gen pht sng trên kính hiển vi có pht huỳnh quang. Kết quả đạt đƣợc Thiết lập đƣợc quy trình tiếp hợp Plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phƣơng php tiếp hợp ba thành phần (triparental mating). Hoàn thiện quy trình kiểm tra gen đã chuyển bằng phƣơng php Dot Blot và xem lại trên kính hiển vi pht huỳnh quang. vi vi MỤC LỤC Nội dung Trang LỜI CẢM ƠN . iii TÓM TẮT iv MỤC LỤC . v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT . ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x DANH SÁCH BẢNG . xi Phần 1. MỞ ĐẦU 1 1.1 Đặt vấn đề 1 1.2 Mục tiêu đề tài . 1 1.3 Đối tƣợng nghiên cứu . 1 1.4 Nội dung thực hiện 2 Phần 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3 2.1 Sự di chuyển gen và ti tổ hợp gen ở vi khuẩn . 3 2.1.1 Hiện tƣợng biến nạp (Transfomation) . 3 2.1.1.1 Định nghĩa . 3 2.1.1.2 Cơ chế hiện tƣợng biến nạp . 3 2.1.2 Hiện tƣợng tải nạp (Transduction) 4 2.1.2.1 Định nghĩa . 4 2.1.2.2 Cơ chế hiện tƣợng tải nạp 4 2.1.3 Hiện tƣợng tiếp hợp ở vi khuẩn (Conjugation) . 5 2.1.3.1 Định nghĩa . 5 2.1.3.2 Thí nghiệm Lederberg và Tatum (1946) . 5 2.1.3.3 Yếu tố giới tính F . 7 2.1.3.4 Cc loại vi khuẩn đực mang yếu tố F 8 2.1.3.5 Cơ chế qu trình tiếp hợp 11 2.1.3.6 Lập bản đồ bằng tiếp hợp 11 2.2 Vch tế bào của vi khuẩn 12 2.2.1 Cấu tạo vch tế bào Gram (+) . 13 vii vii 2.2.2 Cấu tạo vch tế bào Gram (-) 13 2.3 Vi khuẩn – tc nhân phòng trừ sinh học 14 2.4 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 15 2.4.1 Phân loại vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 15 2.4.2 Cc nghiên cứu về vi khuẩn Pseudomonas fluorescens . 15 2.5 Plasmid 18 2.6 Transposon 24 2.6.1 Transposon vi khuẩn . 25 2.6.2 Phân loại transposon . 25 2.6.3 Cơ chế chuyển vị 26 2.6.4 Ứng dụng của transposon . 27 2.7 Protein GFP . 28 2.7.1 Cấu trúc và đặc điểm 28 2.7.2 Tình hình nghiên cứu về gen gfp 29 2.8 Phƣơng php đnh dấu . 31 2.8.1 Phƣơng php nick – translation 32 2.8.2 Phƣơng php random priming 32 2.8.3 Phƣơng php đnh dấu End labelling . 32 2.8.4 Phƣơng php photobiotin 33 2.9 Lai phân tử . 33 2.9.1 Khi niệm về lai phân tử . 33 2.9.2 Cc yếu tố ảnh hƣởng đến sự lai phân tử . 33 2.9.3 Cc kiểu lai phân tử . 34 viii viii 2.9.3.1 Lai trong pha lỏng . 34 2.9.3.2 Lai trên pha rắn 34 Phần 3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 36 3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện khóa luận . 36 3.2 Vật liệu và phƣơng php nghiên cứu 36 3.2.1 Vật liệu thí nghiệm . 36 3.2.1.1 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp . 36 3.2.1.2 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 37 3.2.1.3 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 37 3.2.2 Cc thiết bị, dụng cụ thƣờng sử dụng 39 3.3 Phƣơng php nghiên cứu . 39 3.3.1 Phƣơng php triparental mating tiếp hợp đoạn gen gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 39 3.3.2 Ly trích genomic DNA từ cc dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens đã tiếp hợp 40 3.3.3 Phƣơng php Dot Blot 41 3.3.3.1 Chuyển DNA lên màng . 41 3.3.3.2 Phƣơng php ly trích DNA plasmid sử dụng SDS_kiềm 42 3.3.3.3 Thực hiện đnh dấu đoạn DNA plasmid pUT-gfp . 43 3.3.3.4 Thực hiện phản ứng lai 44 3.3.3.5 Pht hiện kết quả trên phim X - ray 45 3.3.4 Quan st vi khuẩn trên kính hiển vi 46 Phần 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 4.1 Kết quả . 47 4.1.1 Kết quả tiếp hợp đoạn gen gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens . 47 4.1.1.1 Nuôi cấy vi khuẩn trong môi trƣờng LB 47 4.1.1.2 Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trƣờng KB 47 ix ix 4.1.1.3 Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trƣờng M9 . 48 4.1.1.4 Kết quả làm đối chứng 49 4.1.2 Kết quả ly trích genomic DNA từ cc dòng vi khuẩn Pseudomonasfluorescens đã tiếp hợp . 50 4.1.3 Kết quả thực hiên phản ứng lai . 51 4.1.4 Kết quả xem trên kính hiển vi pht huỳnh quang Olympus BX51 53 4.2 Thảo luận . 55 Phần 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 61 5.1 Kết luận . 61 5.2 Đề nghị 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 62 PHỤ LỤC 65 x x DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT aa acid amin bp base pair CTAB Cethyltrimethylammonium bromide DNA Deoxyribonucleic acid 2,4 – DAPG: 2,4 – Diacetylphloroglucinol DIG Digoxigenin ETDA Ethylenediamine tetraacetic acid F Fertility GFP Green Fluorescent Protein Hfr High frequency recombination HRP Horseradish peroxydase IS Insert sequence kb Kilo base kDa Kilo dalton MCS Multi cloning site Nm Nano metre OD Optical density PCR Polymerase Chain Reaction RBS Ribosome binding site RNA Ribonucleic acid RFLP Restriction fragment length polymorphism SDS Sodium dodecyl sulfate SSC Saline sodium citrate TAE Tris Acetate EDTA Tn Tranposon UV Ultraviolet (light) w/v Weight for volume . TH NGỌC HÂN CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận. ***000*** CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận

— Xem thêm —

Xem thêm: Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomanas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần, Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomanas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần, Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomanas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần

Lên đầu trang

Tài liệu liên quan

Từ khóa liên quan

Đăng ký

Generate time = 0.0795149803162 s. Memory usage = 13.93 MB